Luz UV proporciona herramienta de diagnóstico histológico

Un nuevo estudio describe cómo la microscopía con excitación de superficie ultravioleta (MUSE) puede proporcionar imágenes histológicas no destructivas y sin necesidad de láminas.

El método MUSE, desarrollado en la Universidad de California Davis (UCD; EUA), la Universidad de Rochester (NY, EUA) y el Laboratorio Nacional Lawrence Livermore (Livermore, CA, EUA), usa luz ultravioleta (UV) a longitudes de onda en el rango ~ 280 nm para penetrar unas pocas micras en las muestras de tejido. Los núcleos, el citoplasma y los componentes extracelulares reflejan las señales de la excitación de la superficie UV que se pueden detectar mediante cámaras de color convencionales con tiempos de exposición por debajo del segundo. El proceso permite imágenes rápidas de grandes áreas, así como la interpretación inmediata.

El intervalo estrecho de la longitud de onda UV restringe la excitación de las coloraciones fluorescentes convencionales a únicamente la superficie del tejido, proporcionando así imágenes histológicas de diagnóstico, de alta resolución, que se asemejan a las obtenidas con la coloración convencional con hematoxilina y eosina, así como una morfología mejorada e información sobre el contraste del color. Además, los investigadores no encontraron efectos significativos sobre los ensayos moleculares realizados aguas abajo, incluida la hibridación fluorescente in situ y la secuenciación del ARN. El estudio fue publicado el 4 de diciembre de 2017 en la revista Nature Biomedical Engineering.

“Se ha vuelto cada vez más importante enviar porciones relevantes de muestras de tejido a menudo pequeñas para la realización de pruebas de ADN y otras pruebas funcionales moleculares, y algunas veces solo preparar láminas de microscopios convencionales puede consumir la mayoría o incluso todas las muestras pequeñas”, dijo el autor principal, el profesor Richard Levenson, del departamento de patología y medicina de laboratorio de la UCD. “MUSE es importante porque proporciona rápidamente imágenes de tejido fresco sin agotar la muestra”.

“MUSE elimina cualquier necesidad de procesamiento convencional de tejidos con fijación de formalina, inclusión en parafina o la realización de cortes delgados”, concluyó el profesor Levenson. “No requiere instrumentación láser, confocal, multifotón o de tomografía de coherencia óptica, y la tecnología simple la hace muy adecuada para su utilización donde se obtienen y se evalúan las biopsias”.

A diferencia de la luz de longitud de onda más larga, la luz de 280 nm solo penetra a una profundidad de 10 micras o menos, y por lo tanto excita las señales fluorescentes solo de la superficie de la muestra cortada. El modo de visualización de fluorescencia preserva el sombreado de la superficie y las claves de profundidad que permiten la apreciación de los perfiles de la superficie, que son importantes para comprender la organización tridimensional (3D) de las muestras complejas. MUSE puede así proporcionar vistas más allá de lo que se puede ver con el material estándar de corte delgado, generando resultados que se pueden parecer a los que se pueden ver con la microscopía electrónica de barrido (SEM).